外泌体RNA液体活检试剂盒有适合小体积血清的吗？

0.5-1ml血清做外泌体RNA，量少是共性问题。建议优先选膜亲和柱/膜吸附类试剂盒，对低体积样本比沉淀法友好，沉淀法杂蛋白多、RNA纯度可能不稳定。提取前样本处理很重要：血清不要反复冻融，3000g离心后取上清再过0.22μm滤膜或10000g离心去除细胞碎片和血小板。提取时加入外源性cel-miR-39做内标，后续qPCR校正提取效率。Ct值30以后不一定全是提取问题，逆转录和引物效率也要排查。

同时做miRNA和lncRNA要特别问清楚试剂盒是否保留大于200nt的RNA。很多外泌体RNA试剂盒只优化了小RNA，lncRNA回收率很低。建议用同一批0.5ml血清分装，对比两三个试剂盒的总RNA yield、Small RNA芯片或RT-qPCR的miRNA和lncRNA回收。预算200元以内，进口exoRNeasy可能超，可以看国产膜亲和柱产品，或者跟代理商谈小包装试用价。洗脱体积尽量压到10-20μl，低了再用Pico芯片或低输入逆转录kit。

乳腺癌早期标志物筛选，样本量又少，建议先别追求一次拿到全部RNA，可以分步优化。试剂上可联系锐博、宇玫博、恩泽康泰等做外泌体产品的国产厂家，问有没有小体积血清专用提取盒和现货试用。实验设计上，0.5ml血清不要同时检测过多基因，宁可分两管：一管先做miRNA，另一管富集lncRNA，避免互相稀释。qPCR Ct高可尝试预扩增或换上专门针对低输入RNA的逆转录体系。预算200元以内要留意提取盒是否包含内标和质控。

100ul血清试过某品牌，RNA量低但qPCR能出峰，建议用miRNA panel。

小体积样本提取一定要加载体RNA，否则丢得厉害。