血液ctDNA肿瘤突变检测，有没有提取回收率高的试剂盒推荐？

优先选专门针对循环游离DNA的磁珠法或硅胶柱法试剂盒，不要用常规基因组DNA提取试剂凑合。关注说明书中是否明确回收150-200 bp左右的cfDNA小片段，以及是否用微量血浆验证过。判断回收率不能只看提取后浓度，建议买或借一段已知片段大小的cfDNA标准品或把提取后DNA跑AATI/Bioanalyzer看片段分布。2-4 mL血浆注意洗脱体积尽量小，比如20-40 μL，可提高终浓度。若一次过柱效率低，可把样本分两次结合到同一柱子，避免超过柱容量。

浓度低不一定只是提取盒问题，血浆分离很关键。EDTA抗凝血最好2-4小时内两步离心，先低速去细胞，再高速去血小板和碎片，避免溶血释放基因组DNA，否则提取后ctDNA比例被稀释，qPCR Ct值会偏大。2-4 mL血浆量本就不大，不建议反复冻融。提取前如果体积不够，可以用低量保存管减少损耗。国产专门的cfDNA提取试剂盒很多能做到80元以内，但换批次后要与原来那批做平行比对，看Ct值偏移和弱阳性样本检出稳定性。

现货和预算方面，进口经典cfDNA提取试剂盒单次成本通常超过你们预算，货期也可能2-4周；国产专业磁珠法或柱法试剂盒现货多，1周内发货的不少，但要确认是否有医疗器械备案或科研用途。建议先让2-3家供应商提供小样或试用装，用同一批混合血浆分装后平行提取，再做EGFR T790M qPCR，比较Ct值、内参均一性和提取后总量。预算80元以内可谈大包装或科研合作价，别只看目录价。同时问清楚储存条件、裂解结合时间、是否配carrier RNA，这些影响低浓度样本回收。