💡
如何回答这个问题
-
1
看清问题背景
先完整阅读问题描述、分类与标签，确认提问者的真实场景。
-
2
给出可操作的回答
写明具体步骤、注意事项和判断依据，避免只给结论。
-
3
补充参考来源
可以引用标准、文献或产品说明书，让回答更可信。
-
4
等待采纳与反馈
提问者采纳后会收到通知，也可以在评论区继续讨论。
全部回答4
许
许刚6569
2026-09-09
几十ng总RNA做外泌体miRNA和低拷贝mRNA，优先选明确标称适合低起始量或单细胞级别RNA输入的逆转录预混液。这类产品通常含RNA酶抑制剂，且缓冲液针对10μL小体系优化。重点关注说明书是否写着可从10ng甚至更少总RNA稳定反转录，并要求厂家提供低拷贝基因验证数据。
徐
徐小小
2026-07-11
miRNA建议用茎环引物或加尾法专用逆转录引物，普通随机六聚体对短miRNA覆盖可能不足；mRNA可与oligo dT混合使用，提高cDNA完整性和均匀性。高GC模板建议在反转录前将RNA65℃变性5min并迅速冰浴，再进入体系，这步对低起始量样本尤其重要。
B
Bio6527
2026-09-14
10μL体系样本量少，建议使用低吸附离心管和带滤芯枪头，减少管壁与吸附损耗。外源RNA酶抑制剂不能替代操作防护，耗材和台面都要无RNase。如果换酶后Ct仍偏高，先确认RNA完整性和浓度准确性，否则单靠提高酶量或换酶未必能解决。
R
Rex3181
2026-09-22
拿到候选酶后，用同一批RNA做梯度稀释，如50ng、10ng、2ng，比较Ct值线性与反转录效率。高GC模板可试加甜菜碱或DMSO，但要同步做无模板对照，避免引物二聚体升高。价格贵可以接受时，优先选能提供小包装试用且有技术支持、可协助优化低拷贝方案的品牌。
我来回答登录后可提交
回答需要登录会员账号（浏览无需登录）。 立即登录