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Q:PCR 反应中 dNTP 起作用是什么原理?
A:dNTP 既是复制的原料,又为链延长的过程提供能量。在细胞内,DNA 的复制需要四种脱氧核糖核苷酸作为原料,而 PCR 技术扩增目的基因需要的原料却是 dNTP(dATP、dGTP、dCTP、dTTP)(脱氧核苷酸三磷酸)。实际上,在 PCR 技术中,DNA 复制时直接参与合成 DNA 的是四种脱氧核苷酸三磷酸(dATP、dGTP、dCTP、dTTP,统称为 dNTP),在 DNA 聚合酶催化作用下,引物或者已合成的 DNA 链的 3’—羟基对进入的脱氧核苷酸三磷酸α—磷原子发生亲核攻击,从而形成 3’,5’—磷酸二酯键并脱下焦磷酸(PPi),形成磷酸二酯键所需要的能量来自α—与β—磷酸基之间高能磷酸键的裂解。
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