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Q:该产品可作为哪些蛋白酶抑制剂?
A:正钒酸钠是一种常用的竞争性磷酸酶抑制剂,可以抑制碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP) , 酸性磷酸酶(acid phosphatase) , 酪氨酸磷酸酶(tyrosine phosphatase, TP)等,也可以抑制Na+/K+ATPase 等ATPase。
Q:如何使该产品获得最大的磷酸酶抑制活性?
A:使用前,正钒酸钠需要先被充分活化(去聚合)以获得最大的磷酸酶抑制活性,步骤如下:
1)正钒酸钠溶于水配制 200 mM 的溶液,称取适量正钒酸钠粉末溶于纯水中。
2)用 1N NaOH 或 1N HCl 调整 pH 至 10.0。正钒酸钠起始溶液的 pH 值依批次变化而有差异。pH 10.0 溶液呈现黄色。
3)加热煮沸,直至溶液变为无色(大概煮 10 min),所有的结晶必须充分溶解。
4)冷却至室温。
5)重新调整pH 至 10.0,并重复步骤 3)4)直至溶液保持无色且 pH 稳定在 10.0。
6)将活化的正钒酸钠溶液分装成小份(如 1 ml),-20 °C 保存。储存液可直接加入细胞或组织裂解液,稀释到工作液如 1 mM。细胞培养实验需要先用 0.2 um 滤膜过滤除菌后,稀释加入培养基内;
7)从-20 °C 取出分装小样融化后,需加热溶液约至 90~100 °C,漩涡混匀,充分溶解结晶。
Q:该产品的正常使用浓度是多少?
A:常见使用浓度范围为 1-10 mM。
Q:该产品可逆吗?
A:在加入EDTA 或经稀释后,正钒酸钠的抑制表现可逆性。
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