NHS-Activated MagBeads NHS活化磁珠

Q：这种NHS聚合物的磁珠和NHS琼脂糖的磁珠的区别？

A：两者都是表面为NHS基团修饰的磁珠，能够与氨基的蛋白和其他分子形成稳定的肽键，用于亲和纯化或者分析检测抗体、抗原和其他生物分子。聚合物的磁珠一般粒径较小，为1-2μm，主要用于分析检测领域（如体外诊断、微生物检测、免疫沉淀、免疫共沉淀等）；而NHS琼脂糖磁珠是以天然的亲水性高分子琼脂糖为基材的多孔微球，粒径为30~100μm，主要用于分离纯化领域（如蛋白分离纯化、抗体分离纯化）。

Q：磁性微球可以反复使用吗？

A：偶联配体后可以反复使用。但不能更换配体。

Q：为什么储存温度是-20℃，偶联配体后保存温度又是2-8℃？

A：未使用的产品保护液是异丙醇，可以在-20℃中保存不结冰，偶联蛋白后为考虑蛋白稳定性且反复冻融影响填料性能，选择2-8℃保存。

Q：样品浓度达不到5mg/ml，一般卖的抗体是1mg/ml，可以吗？0.2mg/ml的抗体也可以偶联吗？

A：1mg/ml的浓度也是可以偶联的。0.2mg/ml浓度有点低，看下是否能超滤浓缩，低浓度样品的偶联效率无法作保证。推荐用于偶联的抗体浓度＞1mg/ml。

Q：NHS预活化磁珠的这个清洗液1的PH能改吗，一定要PH为3吗？

A：也可以用0.1M 甘氨酸，ph3.0作为清洗液。一般选择这个条件是模拟抗体纯化洗脱液的条件，先进行几次清洗 将结合力弱的蛋白去除，避免后续使用过程中的配体脱落。

Q：在文库的接头上偶连氨基后，是否能和NHS磁珠进行共价结合呢？有偶联方法吗？

A：这个理论上是可行的，关于这方面的应用我们暂时没有数据积累。这个与说明书中蛋白偶联步骤基本一致。样品需在不含伯氨基的离子缓冲液中，磁珠按照说明书中清洗步骤先用稀盐酸清洗然后用偶联液清洗，清洗结束后立即与样品混合接触，28℃偶联4h左右。样品浓度要求以及单位体积磁珠偶联的量，暂无数据。

Q：客户做的是蛋白质组学，蛋白溶液里会含有DNA,RNA，会干扰蛋白吸附吗？含核酸样品的偶联中 如何消除核酸样品的干扰？

A：不能这样操作的，DNA,RNA会有干扰。一般我们只用于纯品的偶联；如果是在NHS磁珠上先固定这蛋白对应的抗体，然后通过抗体结合蛋白， 可以去除多余的核酸。

Q:清洗液1：0.1 M乙酸-乙酸钠，0.5 M NaCI, pH3.0和清洗液 2：0.1 M Tris-HCI, 0.5 M NaCI, pH8.0，这两个清洗液只使用一个可以吗？

A：不可以，这个是模拟纯化条件的平衡和洗脱

Q:1mM Hcl或者欧联液清洗的目的？活化磁珠？2，如果加入PEG和nacl，磁珠是还有可能和蛋白偶联？

A：稀盐酸是清洗去除磁珠保护液。PEG和氯化钠理论不影响NHS偶联。

Q:清洗液1怎么配制？

A：是配0.1M的乙酸钠和0.5M的氯化钠，再用乙酸调PH定容。

Q:用于偶联的抗体对抗体储存液有要求吗？

A：保存液中不能有tris体系，高浓度甘油，叠氮化钠等组分。