链霉亲和素琼脂糖纯化树脂 琼脂糖纯化树脂

Q:大概可结合多少蛋白？

A: 结合生物素化BSA载量约4mg/mL介质。

Q：为什么上样之前用 0.22 µm 或 0.45 µm 滤膜过滤？

A：减少杂质以防阻塞柱子。

Q：底筛板上有气泡的话是否还可以继续实验？

A：最好不要，可轻轻搅拌填料或者敲打层析柱以排除气泡。

Q：为什么电泳无条带？

A：由于盐酸胍的带电性强，会中和SDS的电荷，影响后面蛋白在上样缓冲液里的带电性能，电泳时产生沉淀，导致无法电泳。因此后续可以对样本进行透析或者盐析（透析可利用透析袋，PBS作为透析液，透析两次，每次1小时，透析液的体积可控制在样本的100倍）。

Q：该产品使用后需要用什么清洗？

A：一般用2倍柱体积的0.1 M NaOH或6 M盐酸胍或8 M尿素溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗，来去除一些沉淀或变形物质；用 3-4 倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗，来去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质。

Q：该产品的主要应用是什么？

A：主要是用于固定生物素化抗原纯化抗体或者固定生物素化抗体纯化抗原。如果用于纯化生物素的蛋白，只能在变性的条件下洗脱下来。纯化亚氨基生物素标签蛋白可以在非变性的条件下洗脱。

Q：孵育法纯化的步骤？

A:

1) 根据纯化的样品量，取适量填料加入离心管中，1000 rpm离心1min，吸弃上清；

2) 向离心管中加入5倍介质体积的平衡液清洗介质，1000 rpm离心1min，吸弃上清; 重复两次以上。

3) 加入样品，封闭离心管，4℃振荡孵育2-4 h或者37℃孵育30 min-2 h。

4) 孵育结束后，1000 rpm离心1 min，吸弃上清，上清保留作为流穿，用于电泳鉴定。

5) 用5倍介质体积的洗杂液清洗介质，1000 rpm离心1 min，去除上清 (注意不要吸到介质) ，重复3-5次，中间建议换新离心管。

6) 直接在凝胶中加loading buffer，煮沸，离心，取上清跑胶。