MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF MBP标签蛋白高度交联纯化树脂

Q：为什么柱子反压过高？

A：可能是填料被堵塞；裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前最好用 0.22µm 或0.45µm 滤膜过滤，或离心去除。

Q：为什么洗脱组分中无目的蛋白？

A：先跑胶确定蛋白是未结合还是未洗脱，通过对比纯化样品、流穿液、洗脱液的目的蛋白条带确定。

如果是未结合：1、可能是样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂；建议样品透析或用结合buffer 稀释。2、可能是标签聚集，可以加入1mM的DTT改善此情况。

Q：为什么洗脱样品较杂？

A：1、可以先尝试下在洗杂步骤提高盐浓度或者洗杂buffer中加入终浓度0.1%非离子型去污剂。

2、可能是目的蛋白降解；可以WB验证，建议加一些蛋白酶抑制剂，如 PMSF等。

Q：该产品使用之前能剧烈摇晃吗？

A：不能剧烈摇晃，会破坏高度交联的 6%琼脂糖微球；使用前可轻轻充分颠倒若干次， 使琼脂糖珠混合均匀。

Q：重复使用次数是多少？

A：具体使用次数与样品有关，可以耐受0.1 M氢氧化钠清洗5次后载量仍有80%以上。

Q：孵育法的操作步骤？

A：1）根据纯化的样品量，取适量填料加入离心管中，1000 rpm 离心 1 min，吸弃上清;

2)向离心管中加入5 倍介质体积的平衡液清洗介质，1000 rpm 离心1 min，吸弃上清，重复两次以上。

3)加入样品，封闭离心管，4℃振荡孵育 2-4 h 或者37度孵育30 min-2h。

4)孵育结束后，1000 rpm 离心1 min，吸弃上清，上清保留作为流穿，用于电泳鉴定。

5)用5倍介质体积的洗杂液清洗介质，1000 rpm 离心1 min ，去除上清（注意不要吸到介质），重复 3-5次，中间建议更换新离心管。

6)加入3-5 倍柱体积的洗脱液进行洗脱，温育 5 min，1000 rpm 离心1 min可重复 2-3次。

Q：第一次使用效果是挺不错的，但第二次就不好了

A：洗脱结束后可以用较高浓度（20-50mM）的麦芽糖进行一次较为彻底的洗脱，然后用中性缓冲液冲洗，清洗后保存在20%乙醇 1XPBS中，保存温度2-8℃。如果使用氢氧化钠清洗的话，后续是需要用中性缓冲液例如PBS冲洗至ph中性，只使用纯水冲洗的话无法达到中和ph的效果，可能会有微量氢氧化钠残留在填料上影响后续纯化。

Q：样品表达量变低，有什么建议？

A：可以尝试降低上样流速，延长结合时间来提高目的蛋白和填料的结合效果。

Q：平衡/洗杂缓冲液中EDTA的作用是什么？可以不加吗？

A：EDTA的作用是保护MBP标签蛋白免受蛋白酶降解，减少核酸污染带来的问题。如果没这些问题，可以不加。

Q：平衡/洗杂缓冲液中的NaCl作用是什么？

A：平衡中NaCl是为了抑制非特异性吸附。

Q：洗脱液中的麦芽糖cas号是什么？有没有推荐的货号？

A：洗脱液中的麦芽糖cas号是6363-53-7，推荐货号719576。